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如何確定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)

由于蛋白質(zhì)表面離子化側(cè)鏈的存在 , 蛋白質(zhì)帶凈電荷 。由于這些側(cè)鏈都是可以滴定的(titratable),對于每個蛋白都存在一個pH使它的表面凈電荷為零即等電點(diǎn) 。
在等電點(diǎn)時,蛋白質(zhì)分子以兩性離子形式存在,其分子凈電荷為零(即正負(fù)電荷相等) , 此時蛋白質(zhì)分子顆粒在溶液中因沒有相同電荷的相互排斥,分子相互之間的作用力減弱,其顆粒極易碰撞、凝聚而產(chǎn)生沉淀,所以蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時,其溶解度最小 , 最易形成沉淀物 。等電點(diǎn)時的許多物理性質(zhì)如黏度、膨脹性、滲透壓等都變?。?從而有利于懸浮液的過濾 。在等電點(diǎn)外的所有其他pH值,依據(jù)蛋白質(zhì)所帶凈電荷采用電泳和離子交換層析來分離和分離純化該蛋白質(zhì) 。
【如何確定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)】等電點(diǎn)沉淀主要應(yīng)用于蛋白質(zhì)等兩性電解質(zhì)的分離提純,還可應(yīng)用于大豆異黃酮的分離:用等電點(diǎn)沉淀法脫去蛋白質(zhì),可提高異黃酮制品的純度,異黃酮截留率為7.2%,蛋白質(zhì)截留率為91.1% 。

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