如何提高限制性酶切的反應(yīng)效率

1、DNA純度在DNA樣品中若含有蛋白質(zhì)，或沒有去除干凈制備過程中所用的乙醇、EDTA、SDS、酚、氯仿和某些高濃度金屬離子，均會(huì)降低限制酶的催化活性，甚至使限制酶不起作用；
2、酶切消化反應(yīng)的溫度DNA消化反應(yīng)的溫度，是影響限制內(nèi)切酶活性的一個(gè)重要因素。不同的核酸內(nèi)切限制酶，具有各自的最適反應(yīng)溫度。多數(shù)限制內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度是37攝氏度，少數(shù)限制性內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度高于或低于37攝氏度；
【如何提高限制性酶切的反應(yīng)效率】3、DNA的分子結(jié)構(gòu)DNA分子構(gòu)型對(duì)核酸內(nèi)切限制酶的活性有很大影響，如消化超螺旋的DNA比消化線性DNA用酶量要高出許多倍。有些限制酶在消化它們自己的處于不同部位的限制位點(diǎn)，其效率也有明顯差異。限制性內(nèi)切酶反應(yīng)的終止，通常是采用65攝氏度條件下溫浴5分鐘。

如何提高限制性酶切的反應(yīng)效率

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